外源蛋白質(zhì)的測定

　　即從蛋白質(zhì)水平對(duì)轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行檢測，實(shí)際應(yīng)用中主要采用的是免疫學(xué)檢測法，即Western雜交、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）和試紙條法。免疫學(xué)檢測法可以檢測具有抗原性的蛋白質(zhì)類表達(dá)產(chǎn)物的存在，它是通過抗原抗體特異反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)的。

　　外源蛋白質(zhì)檢測法快速且具有一定的靈敏度，也能進(jìn)行半定量，尤其是試紙條法，不需要特殊的儀器設(shè)備，適用于現(xiàn)場檢驗(yàn)或初篩。但外源蛋白質(zhì)檢測法有三方面的局限性：(1)由于抗原抗體反應(yīng)的專一性，每種轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品都要開發(fā)和建立專門的檢測試劑和方法，而轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品種類繁多，要建立所有轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的蛋白質(zhì)檢測法工作量很大；(2)對(duì)于加工過的轉(zhuǎn)基因食品，其蛋白質(zhì)很容易被破壞，從而影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確行；(3)有些插入基因還具有表達(dá)部位特異性，這些金銀的表達(dá)并不像DNA那樣存在轉(zhuǎn)基因作物的任何部位，甚至有的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的插入基因根本不表達(dá)或表達(dá)量很低。這些都會(huì)影響檢測結(jié)果。

　　外源DNA的檢測

　　目前對(duì)于外源基因的檢測主要是通過對(duì)轉(zhuǎn)入的外源基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后進(jìn)行紫外或熒光檢測。PCR技術(shù)全稱“聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)”，是一種在體外由引物引導(dǎo)的DNA聚合酶催化的聚合反應(yīng)，能在短時(shí)間內(nèi)準(zhǔn)確地將目的序列大量復(fù)制。在轉(zhuǎn)基因食品檢測方面，主要是用于從DNA即基因水平來鑒定被測食品。由于它的快速、靈敏、費(fèi)用低、檢測僅需微量的DNA并且可以同時(shí)檢測多個(gè)樣品，正成為這一領(lǐng)域日趨成熟的方法之一。定性PCR轉(zhuǎn)基因食品重組DNA的基本機(jī)構(gòu)包括啟動(dòng)子、目的基因、終止子和標(biāo)記基因。由于目的基因種類繁多，所以先用轉(zhuǎn)基因食品最常用的轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子CaMV35S、轉(zhuǎn)錄終止子NOS及抗生素抗體基因NPTII三個(gè)序列來設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，對(duì)結(jié)果陽性者可再檢測目的基因。定量PCRPCR反應(yīng)具有高度特異性和敏感性，但對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的要求很高，其結(jié)果易受許多因素的干擾而產(chǎn)生誤差，一般PCR只用作轉(zhuǎn)基因食品的定性篩選檢測。針對(duì)所存在的問題，研究人員在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中引入內(nèi)部參照反應(yīng)，以消除檢測時(shí)的干擾，并與已知含量的序列GMO標(biāo)準(zhǔn)樣的PCR結(jié)果進(jìn)行比較，從而可以半定量地檢測待測樣品的GMO含量。PCR-ELISA這是一種將PCR的高效性與ELISA高特異性結(jié)合在一起的檢測方法，它利用地高辛或生物素等標(biāo)記引物，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與固相板上特異的探針結(jié)合，再加入抗地高辛或生物素的酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物，最后使底物顯色，在酶標(biāo)儀上讀取數(shù)值。利用PCR-ELISA法對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆檢測，靈敏度比歐盟推薦的PCR方法高5倍~10倍。它快速方便，避免了有毒物質(zhì)EB的使用，適合大批量自動(dòng)檢測。